อัลคาไลน์โปรตีเอส

การประยุกต์ใช้และหลักการ

โปรตีเอสอัลคาไลน์นี้ใช้เพื่อตรวจสอบกิจกรรมของโปรตีเอสซึ่งแสดงเป็นหน่วย PC ของการเตรียมที่ได้จาก Bacillus subtilis var และ Bacillus licheniformis var. การทดสอบขึ้นอยู่กับการไฮโดรไลซิสโปรตีนเคซีน 30 นาทีที่ 37 °และ pH 7.0 เคซีนที่ไม่ผ่านการไฮโดรไลซ์จะถูกกำจัดออกโดยการกรองและเคซีนที่ละลายได้จะถูกกำหนดด้วยสเปกโตรโฟโตเมตริก

รีเอเจนต์และการแก้ปัญหาของอัลคาไลน์โปรตีเอส
เคซีนใช้เคซีนเกรด Hammarsten (United States Biochemical Corp. , Catalog No. 12840 หรือเทียบเท่า)
ทริสบัฟเฟอร์ (pH 7.0) ละลายอะมิโนมีเทนเกรดเอนไซม์ (หรือเทียบเท่า) ทริส (ไฮดรอกซีเมธิล) 12.1 กรัมในน้ำ 800 มล. และไตเตรทด้วยกรดไฮโดรคลอริก 1 N ถึง pH 7.0 เทลงในขวดวัดปริมาตร 1,000 มล. เจือจางด้วยน้ำตามปริมาตรแล้วผสม
สารละลาย TCA ละลายกรดไตรคลอโรอะซิติก 18 กรัมและโซเดียมอะซิเตทไตรไฮเดรต 19 กรัมในน้ำ 800 มล. ในขวดปริมาตร 1,000 มล. เติมกรดอะซิติกน้ำแข็ง 20 มล. เจือจางด้วยน้ำตามปริมาตร
สารละลายพื้นผิวละลายอะมิโนมีเทนเกรดเอนไซม์ทริส (ไฮดรอกซีเมธิล) 6.05 กรัมในน้ำ 500 มล. เติมกรดไฮโดรคลอริก 8 มล. ละลายเคซีน 7 กรัมในสารละลายนี้และให้ความร้อน 30 นาทีในอ่างน้ำเดือดกวนเป็นครั้งคราว
ทำให้เย็นลงในอุณหภูมิห้องและปรับเป็น pH 7.0 ด้วยกรดไฮโดรคลอริก 0.2 N เพิ่มกรดอย่างช้าๆด้วยการกวนอย่างแรงเพื่อป้องกันการตกตะกอนของเคซีน โอนส่วนผสมลงในขวดวัดปริมาตร 1,000 มล. เจือจางด้วยน้ำตามปริมาตรแล้วผสม

การเตรียมตัวอย่างโดยใช้ Tris Buffer เตรียมสารละลายของการเตรียมเอนไซม์ตัวอย่างเพื่อให้ 2 มล. ของการเจือจางขั้นสุดท้ายมีระหว่าง 10 ถึง 44 หน่วยโปรตีเอสของแบคทีเรีย

ขั้นตอนของอัลคาไลน์โปรตีเอส
Pipet 10.0 มล. ของ Substrate Solution ลงในหลอดทดลองขนาด 25- × 150 มม. แต่ละหลอดโดยให้หลอดทดลองหนึ่งหลอดสำหรับการทดสอบเอนไซม์แต่ละหลอดหลอดหนึ่งสำหรับเอนไซม์แต่ละตัวว่างและอีกหนึ่งหลอดสำหรับสารตั้งต้นว่าง ปรับท่อให้เท่ากันเป็นเวลา 15 นาทีในอ่างน้ำโดยคงไว้ที่ 37 °± 0.1 °
เริ่มนาฬิกาจับเวลาที่เวลาเป็นศูนย์โดยใช้ปิเปต 2.0 มล. ของการเตรียมตัวอย่างลงในวัสดุพิมพ์ที่ปรับสมดุลอย่างรวดเร็ว ผสมและเปลี่ยนท่อในอ่างน้ำ เติม Tris Buffer 2 มล. (แทนการเตรียมตัวอย่าง) ลงในวัสดุพิมพ์ว่าง หลังจากผ่านไป 30 นาทีเติมสารละลาย TCA 10 มล. ลงในการฟักตัวของเอนไซม์แต่ละครั้งและปล่อยให้สารตั้งต้นว่างเพื่อหยุดปฏิกิริยา อุ่นท่อในอ่างน้ำเพิ่มอีก 30 นาทีเพื่อให้โปรตีนจับตัวกันอย่างสมบูรณ์
เมื่อสิ้นสุดระยะเวลาการให้ความร้อนครั้งที่สองเขย่าท่อแต่ละหลอดแรง ๆ และกรองผ่านกระดาษกรอง Whatman No. 42 ขนาด 11 ซม. หรือเทียบเท่าโดยทิ้ง 3 มล. แรกของการกรอง
[หมายเหตุ: การกรองต้องชัดเจนอย่างสมบูรณ์]
กำหนดค่าการดูดซับของสารกรองแต่ละตัวอย่างในเซลล์ 1 ซม. ที่ 275 นาโนเมตรด้วยเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ที่เหมาะสมโดยใช้การกรองจากวัสดุพิมพ์ว่างเพื่อตั้งค่าเครื่องมือที่ศูนย์ แก้ไขการอ่านแต่ละครั้งโดยลบการอ่านค่าว่างของเอนไซม์ที่เหมาะสมและบันทึกค่าที่ได้รับเป็น AU

Standard Curve Transfer 100.0 mg ของ L-tyrosine เกรดโครมาโตกราฟีหรือเทียบเท่า (Aldrich Chemical Co. ) ซึ่งก่อนหน้านี้ทำให้แห้งเป็นน้ำหนักคงที่ไปยังขวดวัดปริมาตร 1,000 มล. ละลายในกรดไฮโดรคลอริก 0.1 N 60 มล. เมื่อละลายหมดแล้วให้เจือจางสารละลายให้ได้ปริมาตรกับน้ำและผสมให้เข้ากัน สารละลายนี้มีไทโรซีน 100 ไมโครกรัมใน 1.0 มล. เตรียมการเจือจางอีกสามครั้งจากสารละลายสต็อกนี้ให้มีไทโรซีน 75.0, 50.0 และ 25.0 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร ตรวจสอบการดูดซับของสารละลายทั้งสี่ที่ 275 นาโนเมตรในเซลล์ 1 ซม. บนเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ที่เหมาะสมเทียบกับกรดไฮโดรคลอริก 0.006 N เตรียมพล็อตการดูดซับเทียบกับความเข้มข้นของไทโรซีน

การคำนวณอัลคาไลน์โปรตีเอส
หนึ่งหน่วยโปรตีเอสของแบคทีเรีย (PC) ถูกกำหนดให้เป็นปริมาณของเอนไซม์ที่สร้าง L-tyrosine เทียบเท่า 1.5 µg / mL ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขของการทดสอบ
จากเส้นโค้งมาตรฐานและโดยการแก้ไขกำหนดค่าการดูดซับของสารละลายที่มีความเข้มข้นของไทโรซีน 60 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร ควรได้ตัวเลขที่ใกล้เคียงกับ 0.0115 หารค่าที่แทรกด้วย 40 เพื่อให้ได้ค่าการดูดซับเทียบเท่ากับสารละลายที่มีความเข้มข้นไทโรซีน 1.5 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรและบันทึกค่าที่ได้มาเป็น AS
คำนวณกิจกรรมของการเตรียมเอนไซม์ตัวอย่างโดยสมการ

พีซี / g = (AU / AS) × (22 / 30W)

ซึ่ง 22 คือปริมาตรสุดท้ายในหน่วยมิลลิลิตรของส่วนผสมของปฏิกิริยา 30 คือเวลาเป็นนาทีของปฏิกิริยา และ W คือน้ำหนักเป็นกรัมของตัวอย่างต้นฉบับที่ถ่าย

บรรจุภัณฑ์และการเก็บรักษาอัลคาไลน์โปรตีเอส

ถุงบรรจุอาหารแข็ง 25 กก. / บาร์เรล

อัลคาไลน์โปรตีเอสควรเก็บไว้ในที่แห้งเย็นและมีอากาศถ่ายเทได้สะดวกห่างจากแสงแดดความร้อน

การชำระเงิน:T / T, Paypal, Western Union, Alibaba Trade Assurance, VISA, MasterCard, e-Checking, Pay Later, LC และอื่น ๆ