คาตาเลส

การประยุกต์ใช้และหลักการ

ขั้นตอนนี้ใช้เพื่อตรวจสอบกิจกรรม catalase ซึ่งแสดงเป็น Baker Units ของการเตรียมการที่ได้จาก Aspergillus niger var, bovine liver หรือ Micrococcus lysodeikticus การทดสอบเป็นวิธีการลดความเหนื่อยล้าโดยอาศัยการสลายไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ด้วยคาตาเลสและการสลายคาตาเลสพร้อมกันโดยเปอร์ออกไซด์ภายใต้สภาวะควบคุม

รีเอเจนต์และโซลูชั่น
สารละลายแอมโมเนียมโมลิบเดต (1%) ละลายแอมโมเนียมโมลิบเดต 1.0 กรัม [(NH4) 6MoO24 · 4H2O] (Merck, Catalog No. 1182) ในน้ำและเจือจางถึง 100 มล.
0.250 N โซเดียมไธโอซัลเฟตละลายโซเดียมไธโอซัลเฟต 62.5 กรัม (Na2S2O3 · 5H2O) ในน้ำที่เพิ่งต้มและเย็น 750 มล. เติมโซเดียมไฮดรอกไซด์ 0.2 N 3.0 มล. เป็นสารทำให้คงตัวเจือจาง 1,000 มล. ด้วยน้ำแล้วผสม กำหนดมาตรฐานตามคำแนะนำสำหรับ 0.1 N โซเดียมไธโอซัลเฟต (ดูแนวทางแก้ไขและตัวบ่งชี้) และถ้าจำเป็นให้ปรับเป็น 0.250 N

สารละลาย Peroxide Substrate ละลาย 25.0 กรัมของไดบาซิกโซเดียมฟอสเฟต (Na2HPO4) ที่ปราศจากน้ำหรือ Na2HPO4 · 12H2O 70.8 กรัมในน้ำประมาณ 1,500 มล. และปรับเป็น pH 7.0 ± 0.1 ด้วยกรดฟอสฟอริก 85% เติมไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 30% อย่างระมัดระวังเจือจางถึง 2,000 มล. ในบัณฑิตและผสม เก็บในขวดสีเหลืองอำพันที่สะอาดและปิดสนิท สารละลายมีความคงตัวนานกว่า 1 สัปดาห์หากเก็บไว้ที่ 5 °ในภาชนะเต็ม (ด้วยวัสดุพิมพ์ที่เตรียมใหม่ช่องว่างจะต้องใช้โซเดียมไธโอซัลเฟต 0.250 N ประมาณ 16 มล. หากช่องว่างต้องการน้อยกว่า 14 มล. สารละลายพื้นผิวไม่เหมาะสมและควรเตรียมใหม่อีกครั้งการไตเตรทตัวอย่างต้องอยู่ระหว่าง 50% ถึง 80 % ที่จำเป็นสำหรับช่องว่าง)

ขั้นตอน
กำหนดปริมาณตัวอย่างไม่เกิน 1.0 มล. ซึ่งก่อนหน้านี้เจือจางให้มีคาตาเลสประมาณ 3.5 หน่วยเบเกอร์ลงในบีกเกอร์ 200 มล. เติม Peroxide Substrate Solution 100 มล. อย่างรวดเร็วก่อนหน้านี้ปรับเป็น 25 และกวนทันที 5 ถึง 10 วินาที ปิดฝาบีกเกอร์และบ่มที่อุณหภูมิ 25 ± 1 จนกว่าปฏิกิริยาจะเสร็จสมบูรณ์ ผัดแรง ๆ เป็นเวลา 5 วินาทีจากนั้นปิเปต 4.0 มล. จากบีกเกอร์ลงในขวด Erlenmeyer ขนาด 50 มล. เติมกรดซัลฟิวริก 2 N 5 มล. ลงในขวดผสมจากนั้นเติมสารละลายโพแทสเซียมไอโอไดด์ 40% 5.0 มล. ที่เตรียมไว้ใหม่และสารละลายแอมโมเนียมโมลิบดีนัม 1 หยด (1%) แล้วผสม ขณะทำการผสมต่อไปให้ทำการไตเตรทอย่างรวดเร็วไปยังจุดสิ้นสุดที่ไม่มีสีด้วย 0.250 N Sodium Thiosulfate โดยบันทึกปริมาตรเป็นมิลลิลิตรตามที่ S กำหนดค่าว่างเปล่าด้วย Peroxide Substrate Solution 4.0 มล. และบันทึกปริมาตรที่ต้องการเป็นมิลลิลิตรตาม ข.

[หมายเหตุ: เมื่อทดสอบการเตรียมที่ได้จากตับเนื้อแล้วปฏิกิริยาจะเสร็จสิ้นภายใน 30 นาที การเตรียมการที่ได้มาจาก Aspergillus และแหล่งอื่น ๆ อาจใช้เวลาถึง 1 ชั่วโมง ในการตรวจวิเคราะห์เอนไซม์ที่ไม่ทราบแหล่งกำเนิดให้ทำการไตเตรทหลังจากนั้น 30 นาทีจากนั้นในช่วง 10 นาทีหลังจากนั้น ปฏิกิริยาจะเสร็จสมบูรณ์เมื่อการไตเตรทสองครั้งต่อเนื่องเหมือนกัน]

การคำนวณ
หน่วยเบเกอร์หนึ่งหน่วยหมายถึงปริมาณคาตาเลสที่จะย่อยสลายไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 264 มก. ภายใต้เงื่อนไขของการทดสอบ
คำนวณกิจกรรมของตัวอย่างด้วยสมการ
หน่วยเบเกอร์ / g หรือ mL = 0.4 (B S) × (1 / C)

ซึ่ง C คือมิลลิลิตรของส่วนผสมของการเตรียมเอนไซม์ดั้งเดิมที่เติมลงในสารละลาย Peroxide Substrate ทุกๆ 100 มล. หรือเมื่อใช้เอนไซม์เจือจาง 1 มล. C คือปัจจัยเจือจาง B คือปริมาตรเป็นมิลลิลิตรตามที่กำหนดไว้ข้างต้น และ S คือมิลลิลิตรของ 0.250 N Sodium Thiosulfate ตามที่กำหนดไว้ข้างต้น

ใบรับรองการวิเคราะห์

บรรจุภัณฑ์และการจัดเก็บ

ถุงบรรจุอาหารแข็ง 25 กก. / บาร์เรล

Catalase ควรเก็บไว้ในที่แห้งเย็นและมีอากาศถ่ายเทได้ดีห่างจากแสงแดดความร้อน

การชำระเงิน:T / T, Paypal, Western Union, Alibaba Trade Assurance, VISA, MasterCard, e-Checking, Pay Later, LC และอื่น ๆ