นัตโทคินาเสะ

หลักการ

Nattokinase ทำหน้าที่เกี่ยวกับไฟบรินทำลายการเชื่อมโยงของเปปไทด์และสร้างผลิตภัณฑ์ที่ละลายน้ำได้ของกรดที่มีน้ำหนักโมเลกุลต่ำซึ่งวัดโดยเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์

หน่วยกิจกรรม fibrinolityc หนึ่งหน่วย (FU) ถูกกำหนดให้เป็นปริมาณของเอนไซม์ซึ่งจะเพิ่มการดูดซับของฟิลเตรตที่ 275 นาโนเมตรโดย 0.01 ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขที่ระบุในขั้นตอน

REAGENTS ของ Nattokinase
1.0.05M Borate Buffer (pH 8.5) - ละลายโซเดียมบอเรต 9.54 กรัม (Na2B4O710H2O) และโซเดียมคลอไรด์ (NaCl) 4.5 กรัมในน้ำ DI ประมาณ 200 มล. ปรับ pH เป็น 8.5 โดยใช้ 1N HCl แล้วเติมน้ำ DI ลงไป 500 มล.
2.0.2N TCA - ละลายกรดไตรคลอโรอะซิติก 8.17 กรัม (CCl3CO2H) ในน้ำ DI ให้ได้ 250 มล.
3.Thrombin Solution - ใช้เข็มฉีดยาฉีด Borate Buffer 0.05M 5.0 มล. ในขวด Thrombin (Sigma, T-6634) ผัดเบา ๆ ให้ละลายหมด ด้วยเข็มฉีดยาให้โอนส่วนผสม 1 มล. ลงในขวดพลาสติก (100 หน่วย / ขวด) แล้วแช่แข็งเพื่อจัดเก็บ
* ในขณะใช้งานให้เจือจางเนื้อหาของขวดหนึ่งขวดเป็น 4 มล. ของ 0.05 M Borate Buffer แล้วผสมกับปลายปิเปตเตอร์ (ใช้ปลายเดียวกันนี้เมื่อทำการทดสอบ) เพื่อให้ได้ความเข้มข้นสุดท้ายที่ 20 U / ml ตรวจสอบให้แน่ใจว่าละลายหมดแล้ว

4. Acetate Solution (pH 6.0) - ละลาย Sodium Acetate 12.96 g, Anhydrous (CH3CO2Na) ในน้ำ DI เติมสารละลาย 2N Acetic Acid 2.38 มล. และเจือจางถึง 100 มล. ด้วยน้ำ DI

Triton X-100 10% - ละลาย Triton X-100 (t-Octylphenoxypolyethoxyethanol) 5.0 กรัมในน้ำ DI ด้วยความร้อนและเติมน้ำ DI เพื่อให้ได้ 50 มล. เก็บในขวดสีน้ำตาล

5. เอนไซม์เจือจาง - ละลายแคลเซียมซัลเฟต 0.344 กรัมไดไฮเดรต (CaSO42H2O) และโซเดียมคลอไรด์ (NaCl) 0.585 กรัมในน้ำ DI เติมสารละลาย Acetate 2.0 มิลลิลิตรและสารละลายไตรตัน 10% 0.5 มิลลิลิตรและน้ำ DI 1 ลิตร

6. Fibrinogen Substrate - เติม 0.05 M Borate Buffer จำนวน 10.0 มล. ลงใน Fibrinogen 96.0 mg (Sigma, Fraction I type I-S, F8630) ทีละน้อยด้วยการกวนอย่างนุ่มนวลและละลายให้หมดในบีกเกอร์ขนาด 50 มล. เตรียมสดใหม่ทุกวัน (* 1)

                                                                 

การเตรียมสารละลายตัวอย่าง
เจือจางตัวอย่างด้วย Enzyme Diluent เพื่อให้มีการดูดซับที่ถูกต้อง (∠† A) ของฟิลเตรตระหว่าง 0.04 ถึง 0.08 ความเข้มข้นปกติคือ 0.67 ถึง 1.33 FU / ml

ตัวอย่างของ Nattokinase

1. ใส่ Borate Buffer 1.4 มล. และสารละลายพื้นผิว Fibrinogen 0.4 มล. ลงในหลอดหมุนเหวี่ยงน้ำวนที่เหมาะสมและบ่มในอ่างน้ำ37ºCเป็นเวลา 5 นาที
2. เติม Thrombin Solution 0.1 มล. และผสมให้เข้ากันกับน้ำวน
3. หลังจากนั้น 10 นาทีเติมสารละลายตัวอย่างเอนไซม์ 0.1 มล. ผสมเป็นเวลา 5 วินาทีแล้วบ่มที่อุณหภูมิ37ºC
4. หลังจาก 20 และ 40 นาทีนับจากเวลาที่ปฏิกิริยาเริ่มต้นให้ผสมเป็นเวลา 5 วินาทีตามลำดับ
5. หลังจากนั้น 60 นาทีเติมสารละลาย TCA 2 มล. เพื่อหยุดปฏิกิริยาผสมและบ่มที่อุณหภูมิ37ºCต่อไปอีก 20 นาที
6. เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 5,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาที

7. จุ่มสารเหนือตะกอน 1 มิลลิลิตรลงใน QUARTZ cuvette ด้วยปิเปตปาสเตอร์และอ่านค่าการดูดซับ (As) ที่ 275 นาโนเมตร

ว่าง
1. ใส่ Borate Buffer 1.4 มล. และสารละลายพื้นผิว Fibrinogen 0.4 มล. ลงในหลอดทดลองแบบหมุนเหวี่ยงแล้วนำไปบ่มในอ่างน้ำ37ºCเป็นเวลา 5 นาที
2. เติมสารละลาย Thrombin 0.1 มล. และน้ำวน
3. หลังจากนั้น 10 นาทีเติมสารละลาย TCA 2 มล. แล้วผสมเป็นเวลา 5 วินาที
4. เติมตัวอย่าง 0.1 มล. ลงในสารละลายผสมเป็นเวลา 5 วินาทีและบ่มที่อุณหภูมิ37ºCเป็นเวลา 20 นาที
5. เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 5,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาที
6. จุ่มสารเหนือตะกอน 1 มิลลิลิตรลงใน QUARTZ cuvette ด้วยปิเปตปาสเตอร์แล้วอ่านค่าการดูดซับที่ (Ab) 275 นาโนเมตร (* 2)

การคำนวณ
(เป็น - Ab) 1 1
FU / g = _____________ x ________ x _______ x D
0.01 60 0.1

D = ปัจจัยการเจือจาง (1 / น้ำหนัก (g / mL))

ใบรับรองการวิเคราะห์

บรรจุภัณฑ์และการจัดเก็บ

ถุงบรรจุอาหารแข็ง 25 กก. / บาร์เรล

Nattokinase ควรเก็บไว้ในที่แห้งเย็นและมีอากาศถ่ายเทได้ดีห่างจากแสงแดดความร้อน

การชำระเงิน:T / T, Paypal, Western Union, Alibaba Trade Assurance, VISA, MasterCard, e-Checking, Pay Later, LC และอื่น ๆ