เปปทิเดส

b. Take 1.00mL of each of the above personnel (parallel test is required), add 5.00mL of 0.4mol / L sodium carbonate solution, 1.00mL of Folin reagent use solution, place in a 40 ± 0.2 ℃ water bath for 20min, and take it out. Use a spectrophotometer at a wavelength of 680nm and 10mm cuvette. Take the "0" tube containing no tyrosine as blanks, and measure the absorbance respectively. Take the absorbance A as the ordinate and the tyrosine concentration c as the abscissa. , Draw a standard curve (this curve should pass the zero point).

According to the plot or the regression equation, the amount of tyrosine (ug) when the absorbance is 1 is calculated, which is the absorbance constant K value. Its K value should be in the range of 95-100.

2 Determination
(1) Preparation of Peptidase
a. Weigh 1~2g of enzyme powder, accurate to 0.0002g (or absorb 1.00mL of liquid enzyme), dissolve with a small amount of pH6.0 buffer solution, and grind it with a glass rod, then carefully pour the supernatant into a volumetric flask. Add a small amount of the above-mentioned buffer solution to the sediment to dissolve it, and grind it for 3 to 4 times, and finally transfer it all into a volumetric flask, make up to volume with the buffer solution, and shake well. Filter through four layers of gauze, and the filtrate is once again diluted to the appropriate concentration with a buffer according to the enzyme activity for measurement (diluted to the measured absorbance within the range of 0.25 to 0.40).
b. For the determination of enzyme powder, refer to Table A4 for the dilution factor (liquid enzyme can also refer to Table A4 for dilution).

(2) Measurement

a. First put the casein solution into a 40 ± 0.2 ℃ constant temperature water bath and preheat for 5min.
b. Follow the procedure below:
Test tube A (blank)
→ Add 1.00mL of enzyme solution (40 ± 0.2 ℃)
→ Add 2.00mL of trichloroacetic acid (shake well) (40 ± 0.2 ℃)
→ Add casein 1.00mL (shake well)
→ Take it out for 10 minutes and filter
→ take 1.00mL filtrate
→ Add sodium carbonate solution 5.00mL
→ 1.00 mL of Jiafulin reagent solution (40 ± 0.2 ℃, color development 20min)
→ At a wavelength of 680nm, measure its absorbance with a 10mm cuvette

Test tube B (enzyme sample, three parallel samples are required)
→ Add 1.00mL of enzyme solution (40 ± 0.2 ℃)
→ Add casein 1.00mL (shake well, react at 40 ± 0.2 ℃ for 10min)
→ Add 2.00mL of trichloroacetic acid (shake well)
→ Take it out for 10 minutes and filter
→ take 1.00mL filtrate
→ Add sodium carbonate solution 5.00mL
→ 1.00 mL of Jiafulin reagent solution (40 ± 0.2 ℃, color development 20min)
→ At a wavelength of 680nm, measure its absorbance with a 10mm cuvette

Calculation
X = A × K × 4/10 × n = 2/5 × A × K × n
In the formula:
X ---- enzyme activity of the sample, u / g (u / mL);
A ---- The average absorbance of the sample in parallel test;
K ---- absorption constant;
4 ---- the total volume of the reaction;
10 --- reaction time 10min, calculated as 1min;
n ---- Dilution multiple.

The result obtained is expressed as an integer.

The allowable difference between the results of parallel tests shall not exceed 3%.

CERTIFICATE OF ANALYSIS 

ความหมายของเปปทิเดส

ผงเอนไซม์ 1g (หรือเอนไซม์เหลว 1 มล.) ที่อุณหภูมิ 40 â„ ƒ pH6.0 1 นาทีไฮโดรไลซ์เคซีนเพื่อผลิตไทโรซีน 1ug เป็นหน่วยกิจกรรมของเอนไซม์ใน u / g (u / mL)

วิธีฟอรินต์

หลักการของเปปทิเดส
เปปทิเดส hydrolyzes casein substrates at 40 ° C and pH 6.0 to produce amino acids containing phenolic groups. Under alkaline conditions, Folin reagent is reduced to form molybdenum blue and tungsten blue. Measure with spectrophotometer and calculate. Its enzyme activity.

น้ำยาและสารละลาย
1 Preparation of เปปทิเดส
ในอุปกรณ์ reflow ในโรงงานขนาด 2,000 มล. เติมโซเดียม tungstate 100 กรัม (Na2WO4 · 2H2O) โซเดียมโมลิบเดต 25 กรัม (Na2MOO4 · 2H2O) น้ำ 700 มล. 50 มล. ของกรดฟอสฟอริก 85% เข้มข้น 100 มล. กรดไฮโดรคลอริกต้มด้วยความร้อนต่ำเป็นเวลา 10 ชั่วโมงถอดตัวทำความเย็นไหลย้อนในตู้ดูดควันเติมลิเธียมซัลเฟต 50 กรัม (LiSO4) น้ำ 50 มล. และน้ำโบรมีนเข้มข้นสองสามหยด (99%) แล้วต้มให้เดือด 15 นาทีเพื่อขจัดโบรมีนส่วนเกินออก (เติมน้ำโบรมีนสีเขียวหลังจากเย็นและเดือดเล็กน้อยเอาโบรมีนส่วนเกินออก) ทำให้เย็นเติมน้ำลงในปริมาตร 1,000 มล. ผสมให้เข้ากันแล้วกรอง น้ำยาควรเป็นสีเหลืองทองและเก็บไว้ในขวดสีน้ำตาล
ใช้วิธีแก้ปัญหา: ผสมน้ำยาฟูลินหนึ่งส่วนกับน้ำสองส่วนแล้วเขย่าให้เข้ากัน
2 สารละลายโซเดียมคาร์บอเนต c (Na2CO3) = 0.4mol / L
ใช้โซเดียมคาร์บอเนตปราศจากน้ำ 42.4 กรัมละลายในน้ำและสูงถึง 1,000 มล.
3 กรดไตรคลอโรอะซิติก c (CCL3 · COOH) = 0.4mol / L
ใช้กรดไตรคลอโรอะซิติก 65.4 กรัมละลายในน้ำและได้มากถึง 1,000 มล.
4 สารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ c = 0.5mol / L
จัดทำขึ้นตาม GB 601
5 สารละลายกรดไฮโดรคลอริก c = 1mol / L และ 0.1mil / L
GB 601: วัดกรดไฮโดรคลอริก 90 มล. เทลงในน้ำ 1,000 มล. และเขย่าเพื่อให้ได้กรดไฮโดรคลอริก 1mol / L
วัดกรดไฮโดรคลอริก 9 มล. เทลงในน้ำ 1000 มล. เขย่าให้ได้กรดไฮโดรคลอริก 0.1mol / L
6 สารละลายบัฟเฟอร์
ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH = 6.0) สำหรับโปรตีเอสรสชาติ
น้ำหนัก 45.23 กรัมของไดโซเดียมไฮโดรเจนฟอสเฟต (Na2HPO4 · 12H2O) และกรดซิตริก 8.07 กรัม (C6H6O7 · H2O) ละลายในน้ำและสร้างได้ถึง 1,000 มล. หลังจากเตรียมการแล้วให้ใช้เครื่องวัดค่า pH เพื่อแก้ไข
7 สารละลายเคซีน 10g / L (เคซีน)
ชั่งเคซีน 1.000 กรัมแม่นยำถึง 0.001 กรัมเปียกด้วยสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 0.5mol / L ปริมาณเล็กน้อยเติมบัฟเฟอร์ pH 6.0 ประมาณ 80mL แล้วคนให้เข้ากันขณะให้ความร้อนในอ่างน้ำเดือดจนละลายหมด โอนไปยังขวดวัดปริมาตร 100 มล. และเจือจางลงในเครื่องหมายด้วยบัฟเฟอร์ pH 6.0 สารละลายนี้จะถูกเก็บไว้ในตู้เย็นเป็นเวลา 3 วัน
8 สารละลายมาตรฐาน 100ug / mLL-tyrosine
ก. น้ำหนัก 0.1000 กรัมของ L-tyrosine ทำให้แห้งโดยให้น้ำหนักคงที่ที่ 105 ° C แม่นยำถึง 0.0002 กรัมและละลายด้วยกรดไฮโดรคลอริก 1 mol / L 60 มล. เพื่อให้ได้ถึง 100 มล.
ข. ปิเปต 10.00 มล. ของสารละลายมาตรฐานไทโรซีน 1 มก. / มล. และสร้างได้ถึง 100 มล. ด้วยกรดไฮโดรคลอริก 0.1 โมล / ลิตรเพื่อให้ได้สารละลายมาตรฐานไทโรซีน 100 ug / mLL

Instruments and equipment Of เปปทิเดส
1 อ่างน้ำอุณหภูมิคงที่: 40 ± 0.2 â„ ƒ
2 เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์: ควรเป็นไปตามข้อกำหนด GB 9721

Analysis steps Of เปปทิเดส
1 การวาดเส้นโค้งมาตรฐาน
ก. L- ไทโรซีนสารละลายมาตรฐานจัดทำขึ้นตามตาราง A3

ตาราง A3

บรรจุภัณฑ์และการจัดเก็บ

ถุงบรรจุอาหารแข็ง 25 กก. / บาร์เรล

เปปทิเดส should be sฉีกในที่แห้งเย็นและมีอากาศถ่ายเทได้ดีห่างจากแสงแดดความร้อน

การชำระเงิน:T / T, Paypal, Western Union, Alibaba Trade Assurance, VISA, MasterCard, e-Checking, Pay Later, LC และอื่น ๆ